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深入了解下分光光度計(jì)的使用原理

2025年04月01日 07:13來(lái)源:上海奧析科學(xué)儀器有限公司 >>進(jìn)入該公司展臺(tái)人氣:41


  分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。該儀器是實(shí)驗(yàn)室、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、食品廠、飲用水廠等機(jī)構(gòu)*檢驗(yàn)設(shè)備。已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。分光光度計(jì)基本原理是指采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源,光源透過(guò)測(cè)試的樣品后,部分光源被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(zhǎng)度)成正比,其關(guān)系如下式:
 
  A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
 
  式中 :
 
  A 為吸光度;
 
  I。為入射的單色光強(qiáng)度;
 
  I 為透射的單色光強(qiáng)度;
 
  T 為物質(zhì)的透射率;
 
  k 為摩爾吸收系數(shù);
 
  L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(zhǎng);
 
  c 為物質(zhì)的濃度。
 
  物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
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